特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！ 產品名稱 | 人鼻病毒29探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Human Rhinovirus 29 | 貨號 | YSP96844 |
熒光染料的優(yōu)點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
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熒光定量PCR原理：
產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
4,4''-二溴對三聯(lián)(>95.0%(GC))氟溴 4,4''-二對三聯(lián)(>98.0%(GC))2-酸 2,7-二溴芴(>98.0%(GC))BOC-DL-氨酸 2,7-二溴-9-芴酮(>98.0%(GC))四丁基化銨(水合物) 2,7-二溴萘(>98.0%(GC))2-羥甲基-3,二氫吡喃 2,7-二溴-9,9'-螺二[9H-芴](>98.0%(HPLC)(T))(2-吡啶基)-D-氨酸 4,7-二溴-2,1,并噻二唑(>98.0%(GC))Boc-(吡啶基)-D-氨酸 2,7-二溴-9,9-二甲基芴(>98.0%(HPLC))N-基雙(三氟磺酰)亞 2,2'-二溴-9,9,-螺二[9H-芴](>95.0%(GC))2,4,6-三嘧啶 2,7-二溴-9,9-二己基芴(>98.0%(HPLC))(S)-哌啶甲酸酯 2,7-二溴-9,9-二正辛基芴(>98.0%(HPLC))5-溴-2-甲氧基酚 2,5-二溴噻唑(>97.0%(GC))2--6-羥基煙酸 2,5-二溴硒酚(>98.0%(GC))氨基四氫吡喃 2,6-二溴萘(>98.0%(GC))二 1,二溴-7-叔丁基芘(>97.0%(GC))-2-基吡啶 6,12-二溴屈(>98.0%(HPLC))2--5-氟煙酸 9,9-二甲基-9H-9-硅芴(>98.0%(GC))2-氨基-5-溴酚 2,7-二溴菲-9,10-二酮(>97.0%(GC))5-溴-2-羥基嘧啶
人鼻病毒29探針法熒光PCR檢測試劑盒BOLA1蛋白抗體IL-1ra/FITC 熒光素標記白介素-1受體拮抗劑抗體IgG100 ul BOLA2蛋白抗體IL-1RA (Inrleukin-1 receptor antagonist) /FITC 熒光素標記兔抗、大、、豬、牛、羊、犬白介素-1受體拮抗劑抗體IgG20 ul 殺菌通透性增加蛋白樣1抗體IL-1R I /FITC 熒光素標記白介素1受體Ⅰ抗體IgG100 ul 殺菌/通透性增加蛋白樣2抗體IL-1R II /FITC 熒光素標記白介素1受體Ⅱ抗體IgG500 ul 嗜脂蛋白樣3抗體IL1RAPL1 /FITC 熒光素標記白介素受體相關蛋白樣1前體蛋白抗體IgG100 ul 殺菌/通透性增加蛋白樣3抗體IL-2/FITC 熒光素標記白介素2抗體IgG100 ul BRD1蛋白抗體IL-2/FITC 熒光素標記白介素2抗體() IgG100 ul BRPF3蛋白抗體ITK/PSCTK2/FITC 熒光素標記兔抗、大、IL-2誘導型T細胞激酶抗體IgG100 ul BXDC1蛋白抗體IL-2R Gamma/FITC 熒光素標記白介素2受體γ鏈抗體IgG100 ul |
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