灰馬杜拉分枝菌探針法熒光PCR檢測試劑盒

特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

熒光染料的優(yōu)點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
?
熒光定量PCR原理：
產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
2,2-雙(2-羥基-5-聯(lián)基)烷(>98.0%(HPLC))2-酰氨基-5-氨基吡啶

2,2-雙(羥基-異基)烷(>98.0%(GC))2-酰基-5-硝基吡啶

4,4'-異亞基二氧基酸(>98.0%(HPLC)(T))3,4,5,6-四-2-氨基吡啶

4,4'-異亞基二酚二甲基酸酯(>98.0%(GC))3,4,5-三吡啶-2-甲酸

四溴雙酚A(>98.0%(GC)(T))3,4,5-三-2-*基吡啶

四溴雙酚A雙(2-羥基)(>93.0%(GC))3,4,5-三-6-羥基吡啶-2-羧酸

α,α,α'-三(羥基)-1-基-異(>98.0%(GC))3,5,6-三吡啶-2-甲酸

2,2-雙(氨基-甲基)六氟烷(>98.0%(HPLC)(T))3,6-二氟吡啶-2-甲酸

2,2-雙[(氨基氧基)]六氟烷(>97.0%(HPLC)(T))3,6-二氟吡啶-2-基

2,2-雙(氨基基)六氟烷(>98.0%(GC)(T))3,6-二2-吡啶甲酰

2,2-雙(羧基基)六氟烷(>98.0%(T))3,6-DICHLOROPICOLINONITRILE

2,2-雙(氨基-羥基)六氟烷(>98.0%(T))氨基-5-甲氧基吡啶

2,2-雙(異酸基)六氟烷(>98.0%(GC))氟-6-羥基-2-吡啶甲酸

2,2-雙(氨基基)六氟烷(>98.0%(GC)(T))甲氧基-嘧啶羧基 酸

4,4'-(六氟異亞基)二酞酸酐(>98.0%(GC)(T))2--1H-吲哚-甲

均四甲酸二酐(>98.0%(T))5-溴-2-吡啶-

3,3',4,4'-二酮四羧酸二酐(>96.0%(T))2-并噻唑-6-甲酸酯

雙環(huán)[2.2.2]辛-7--2,3,5,6-四甲酸二酐(>95.0%(T))3,5,6-三吡啶-2-鈉鹽
灰馬杜拉分枝菌探針法熒光PCR檢測試劑盒膜輔蛋白抗體MrpL28 /FITC  熒光素標記線粒體核糖體蛋白L28抗體IgG200 ul

CXC趨化因子16抗體 Alpha-MSH/POMC /FITC  熒光素標記α黑素細胞刺激素/阿黑皮素原抗體IgG20 ul

細胞色素c氧化酶IV亞型1抗體MSH-2/FITC  熒光素標記錯配修復蛋白2抗體IgG100 ul

1號染色體開放閱讀框227抗體MSK1/FITC  熒光素標記有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體IgG10 ug

2號染色體開放閱讀框71抗體Phospho-MSK1 (Ser360)/FITC  熒光素標記酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體IgG100 ul

細胞質膜微囊蛋白-1抗體Phospho-MSK1 (Ser212)/FITC  熒光素標記酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體IgG100µl

腫瘤轉移抑制蛋白1抗體Phospho-MSK1 (Ser376) /FITC  熒光素標記酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體IgG100 ul

半胱酸蛋白酶蛋白-12抗體Phospho-MSK1 (Thr581) /FITC  熒光素標記酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體IgG100 ul

細胞角蛋白17抗體MSLN /FITC  熒光素標記間皮素抗體IgG20 ul