單純皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
性成纖維生長因子6-吲哚

大內(nèi)皮素-1（1-38），人1-丁基-甲基咪唑四氟酸鹽

大內(nèi)皮素-1 （1-39），豬18-冠-6

腦鈉素-32，大鼠5-氨基-甲基-1,2,噻二唑

鈴蟾肽三叔丁氧基氫化鋁鋰

緩激肽(S)-(-)-N-芐基-alpha-甲基芐

緩激肽（1-5）甲基-甲

緩激肽（1-6）氨基-三氟甲氧基甲

緩激肽（1-7）6--3,二氫-1H-2-萘酮

頰肽甲氧基噻吩

酸酶，雞環(huán)甲酸

降鈣素，人(S)-2-基-1-

降鈣素，大鼠芐氧羰酰基甘氨酸

降鈣素基因相關肽（8-37），人5-溴

降鈣素基因相關肽Ⅱ，人硫酸銨

降鈣素基因相關肽，大鼠2,3,三氟溴

蛋白酶1底物2m，熒光基-氟甲酸

蛋白酶3底物1m，熒光6-氨基-2-酚
單純皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒ATP5A抗體FST/FITC  熒光素標記抗卵泡抑素抗體IgG20 ul

即刻早期基因ARC抗體F1 operon positive regulatory proin(NT)/FITC  熒光素標記鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（N端）IgG100 ul

ADP核糖基化因子6抗體F1 operon positive regulatory proin(CT)/FITC  熒光素標記鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端）IgG20 ul

芳香化酶抗體Gab1/FITC  熒光素標記兔抗、大、接頭蛋白Gab 1抗體IgG100 ul

Armin抗體Gab2/FITC  熒光素標記接頭蛋白Gab 2抗體IgG100 ul

alpha 1腎上腺素能受體A抗體Phospho-Gab1 (Tyr627) /FITC  熒光素標記兔抗、大、接頭蛋白Gab 1抗體IgG1 ml

血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體Phospho-Gab1 (Tyr659) /FITC  熒光素標記兔抗、大、接頭蛋白Gab 1抗體IgG100 ul

活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體GABA-AR Alpha1/FITC  熒光素標記γ1氨基丁酸受體α1抗體IgG100 ul

血管緊縮素樣蛋白1抗體GABA-B-R1/FITC  熒光素標記抗g-氨基丁酸B1受體抗體IgG100 ul