羊仰口線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒

樣品RNA的抽提：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。

熒光定量PCR試劑盒技術：
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
異辛烷(色譜級)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (HRP Conjuga)反-1,二氯-2-

甲基叔丁基(色譜級)Aurora A (D3E4Q) Rabbit mAb6-羥基-1-萘甲酸

正丁(色譜級)Aurora A (D3E4Q) Rabbit mAb2-氯-氟甲

1-氯丁烷(色譜級)Anoctamin 1 (D1M9Q) Rabbit mAb氯-(三氟甲氧基)

N，N-二甲酰(色譜級)PTMScan® Pilot Phospho-Tyrosine Rabbit mAb (P-Tyr-1000) Kit間三氟酮

1,二氧六環(huán)(色譜級)CYR61 (D4H5D) XP® Rabbit mAb甲基吡唑-羧酸

乙二二甲(色譜級)CYR61 (D4H5D) XP® Rabbit mAb雷奈佐利

乙酸乙酯(色譜級)CD39/NTPDase 1 (E2X6B) XP®Rabbit mAb (Mouse Specific)3,6-二氯噠-

甘油(色譜級)CD39/NTPDase 1 (E2X6B) XP®Rabbit mAb (Mouse Specific)2-氨基-三氟

N-甲基吡咯烷酮（NMP）(色譜級)PTMScan^®Pilot Ubiquitin Remnant Motif (K-ε-GG) Kit2,二氟

甲基環(huán)己烷(色譜級)Rad9A (D2J4P) Rabbit mAb2-氯甲酯

碳酸酯(色譜級)VGLUT2 (D4E3U) Rabbit mAb1,二溴-5-氯

四(色譜級)ATP6V1B2 (D3O7Q) Rabbit mAb溴-甲氧基甲

三乙(色譜級)EDC3 (D2T7U) Rabbit mAb磺酰磺隆

三（TFA）(色譜級)OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb氯-5-甲氧基-甲酸

四乙基氫氧化銨(10%的水溶液)[離子對色譜級]PTMScan® Pilot Acetyl-Lysine Motif [Ac-K] Kit吡啶-磺酰氯鹽酸鹽

四丁基氫氧化銨(10%的水溶液)[離子對色譜級]EAAT3 (E1E6M) Rabbit mAb丁基黃原酸

四正丁基溴化銨[離子對色譜級]PathScan® Total Ki-67 Sandwich ELISA Kit安宮
羊仰口線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)ELISA試劑盒HO-2  血紅素氧合酶2抗體100 ul

低密度脂蛋白受體相關蛋白1(LRP-1)ELISA試劑盒HOXB4  HOXB4抗體100 ul

低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)ELISA試劑盒HOXc8  HOXc8抗體100 ul

低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒PSGD/HOXB13  同源盒蛋白HOXB13抗體100 ul

低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)ELISA試劑盒Heparanase  乙酰肝素酶抗體100 ul

登革熱抗體IgM(DF-Ab IgM)ELISA試劑盒phospho-HP1 alpha (Tyr24)  酸化異染色質(zhì)蛋白1抗體（果蠅）100 ul

登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒HOXA10  HOXA10抗體100 ul

登革熱(DF)抗體(IgG)ELISA試劑盒Phospho-HP1(Tyr43)  異染色質(zhì)蛋白1酸化抗體（果蠅）100 ul

的牛血清白蛋白(BSA)ELISA試劑盒HPL/PL  胎盤泌素抗體100 ul