博茲曼熒光桿菌PCR檢測試劑盒說明書

服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。

實驗外包:
1.基因組學：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉錄組學：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質組學：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質檢測：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型：原代細胞、細胞模型、動物模型構建

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特點優勢：
    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：產品僅用于科研檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
     5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 產品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
硫柳汞鈉/乙基汞硫代楊酸鈉/硫柳汞酸鈉/乙汞硫楊酸鈉鹽/乙基噻吩酸鈉鹽/乙汞硫柳酸鈉/Merthiolate sodium 質量規格：D,99.9% 包裝;1g

鈉/疊氮鈉/迭氮鈉/迭氮化鈉/Sodium azide 質量規格：D,99.9% 包裝;250mg

間苯二酚/雷瑣辛/樹脂酚/間二羥基苯/1,3-苯二酚/1,3-二羥基苯/雷鎖酚/Resorinol 質量規格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O  包裝;250mg

2-氨基酚/2-氨基苯酚/鄰氨基苯酚/鄰氨基酚/2-羥基/2-氨基-1-羥基苯/鄰羥基/2-Aminophenol 質量規格：D, 99%, acidity 96-98% IN D2O  包裝;100g

3-氨基酚/間氨基酚/間氨基苯酚/3-羥基/3-氨基-1-羥基苯/3-氨基苯酚/間羥基/毛皮棕EG/烏爾茲EG/3-Aminophenol 質量規格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O  包裝;500g

4-氨基酚/對氨基酚/4-氨基苯酚/對氨基苯酚/4-羥基/4-氨基-1-羥基苯/對羥基/P-氨基苯酚/4-Aminophenol 質量規格：D, 99.5%  DCL 20% IN D2O  包裝;1g

重蒸酚/苯酚/羥基苯酚/酚/石炭酸/羥基苯/工業酚/石碳酸/Phenol 質量規格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O 包裝;5g

飽和酚/平衡酚/Phenol Water 質量規格：D, 99.5%  DCL 20% IN D2O  包裝;1g

Tris-飽和酚/Tris平衡苯酚/Tris平衡酚/Tris-Phenol 質量規格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O 包裝;1g

三季銨酚/加拉銨/2-[2,6-雙(2-三乙基銨乙氧基)苯氧基]乙基三乙基銨三化物/馳肌/化浸酚銨/Gallamine triethiodide 質量規格：D, 99.5%  DCL 20% IN D2O  包裝;25g

3，5-二羥基甲苯/合5-甲基間苯二酚/3,5-甲苯二酚/甲基樹脂酚/苔黑酚/苔黑素/5-甲基間苯二酚/俄耳辛/衣酚/地衣酚/3,5-二羥基甲苯一物/5-甲基-1,3-苯二酚/臺黑酚/3,5-Dihydroxytoluene 質量規格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O 包裝;5g

對苯二酚/氫醌/1,4-二羥基苯/幾奴尼/海得/1,4-苯二酚/雞納酚/孔奴尼/羥基苯酚/Hydroquinone 質量規格：D,99% 包裝;100g

4-乙酰氨基酚/對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯酚/撲熱息痛/N-乙酰對氨基酚/對羥基乙酰/N-(4-羥基苯基)乙酰胺/醋氨酚/對羥基苯基乙酰胺/APAP 質量規格：D,99.5%+0.05%TMS 包裝;25g

香芹酚/香荊芥酚/異丙基甲苯酚/羥基異丙基甲苯/香旱芹菜酚/香旱芹子油酚/異丙基鄰甲酚/2-甲基-5-異丙基-1-苯酚/5-異丙基-2-甲基苯酚/2-甲基-5-異丙基苯酚/異百里酚/2-對傘花酚/2-羥基對傘花烴/2-羥基對異丙基甲苯/Carvacrol 質量規格：D,99.5% 包裝;500g

丁香油酚/丁子香酚/丁香酚/丁子香酸/4-烯丙基-2-甲氧基苯酚/2-甲氧基-4-烯丙基酚/4-烯丙基愈瘡木酚/2-甲氧基-4-(2-基)苯酚/2-甲氧基-4-基苯基苯/烯丙基甲氧基苯酚/異丁香酚苯/Eugenol 質量規格：D,99.5%+0.03%TMS 包裝;1g

2-甲氧基酚/愈創木酚/2-甲氧基苯酚/甲基兒茶酚/鄰羥基苯甲醚/鄰甲氧基苯酚/2- Methoxyphenol 質量規格：D,99.5% 包裝;5g

3-甲氧基酚/3-羥基茴香醚/3-甲氧基苯酚/3-羥基苯甲醚/間羥基苯甲醚/間甲氧基酚/間苯二酚一甲醚/1-羥基-3-甲氧基苯/對甲氧基苯酚/間甲氧基苯酚/間苯二酚單甲醚/3-Methoxyphenol 質量規格：D,99.5%+0.03%TMS 包裝;500ug
博茲曼熒光桿菌PCR檢測試劑盒說明書Yarrowia│lipolytica 中文名稱：解脂耶羅維亞酵母種屬:Yarrowia│lipolytica分離基物:生物樣/紅海欖/枝提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:近海酵母培養方法培養基:513生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法 純度：>98.0%(GC)

Cryptococcus│aureus 中文名稱：金色隱球酵母種屬:Cryptococcus│aureus分離基物:沉積物/表層沉積物提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:生物轉化微生物/蛋白含量高培養方法培養基:513生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法 純度：>98.0%(GC)

Micrococcus│terreus 中文名稱：土微球菌種屬:Micrococcus│terreus分離基物:沉積物/多管沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:未檢測到果膠酶、酪蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶、瓊脂酶，檢測到過氧化氫酶培養方法培養基:471生長條件:30℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：90%

Ectothiorhodospira│sp. 中文名稱：外硫紅螺菌種屬:Ectothiorhodospira│sp.分離基物:樣/鹽場表層泥提供形式:其它安全等級:1模式菌株:no應用領域:微生物/耐鹽堿菌培養方法培養基:1004生長條件:25-35℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：90%

Vibrio│ponticus 中文名稱：黑海弧菌種屬:Vibrio│ponticus分離基物:樣/海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:科研參考菌株培養方法培養基:471生長條件:26℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：90%

Vibrio│mediterranei 中文名稱：地中海弧菌種屬:Vibrio│mediterranei分離基物:沉積物/海洋沉積物提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應用領域:模式菌株:培養方法培養基:471生長條件:26℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Phenylobacterium│sp. 中文名稱：苯基桿菌種屬:Phenylobacterium│sp.分離基物:樣/上層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:海洋可培養細菌多樣性研究培養方法培養基:511生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Isoptericola│variabilis 中文名稱：變異白蟻菌種屬:Isoptericola│variabilis分離基物:沉積物/重力活塞取樣提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:海洋放線菌培養方法培養基:471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：97%,含 900 ppm MEHQ 穩定劑