貝爾格萊德病毒型PCR檢測試劑盒說明書

實驗外包:
1.基因組學：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉錄組學：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質組學：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質檢測：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型：原代細胞、細胞模型、動物模型構建
服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。

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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 產品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
特點優勢：
    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：產品僅用于科研檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
     5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
氨甲蝶呤/甲氨蝶呤/甲氨基葉酸/氨甲葉酸/對-[(2,4-二氨基喋啶-6)-N-甲基甲氨基]苯甲酰谷氨酸/二合氨甲嘌呤/(+)氨甲蝶呤/N-[4-[[(2,4-二氨基-6-蝶啶)甲基]甲氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸/MTX 質量規格：HPLC≥98%，標準品 包裝;100g

N6-異戊烯基腺嘌呤/異戊烯酰嘌呤/6-(γ,γ-二甲基烯丙基胺)嘌呤/6-(γ,γ-二甲基烯丙基氨基)嘌呤/2-IP 質量規格：HPLC≥97%，標準品 包裝;25g

N6-苯甲酰基腺嘌呤/N-(5H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺/N-芐基氨基嘌呤/N6-Benzoyladenine 質量規格：HPLC≥98%，標準品 包裝;5g

/N-二甲氨基琥珀酰胺酸/N-二甲基琥珀酰肼/比久/調節劑995/丁二酸單(2,2-二甲基酰肼)/丁二酸-N,N-二甲基酰肼/N-二基琥珀酰胺/琥珀酸2，2-二/單(2,2-二甲基酰肼)丁二酸酰肼/DMASA/SADH/B9 質量規格：HPLC≥98%，標準品 包裝;1g

乙烯利/2-氯乙基磷酸/乙烯磷/艾斯勒爾/玉米健壯素/(2-氯乙基)膦酸/2-氯乙基膦酸/Ethephon 質量規格：HPLC≥98%，標準品 包裝;5g

3-吲哚乙酸/吲哚-3-乙酸/氮茚基乙酸/雜茁長素/吲哚乙酸/β-吲哚乙酸/2-(3-吲哚基)乙酸/生長素/3-吲哚醋酸/IAA/IUPAC 質量規格：HPLC≥99%,標準品 包裝;1g

3-吲哚乙酸鈉/吲哚-3-乙酸鈉/吲哚乙酸鈉/IAA-Na 質量規格：≥98%,BR 包裝;5g

3-吲哚丙酸/吲哚丙酸/吲哚-3-丙酸/氮茚基丙酸/3-（3-吲哚基）丙醇/IPA 質量規格：HPLC≥98%，標準品 包裝;1g

3-吲哚丙酸鉀/吲哚丙酸鉀/吲哚-3-丙酸鉀/IPA-K 質量規格：含量測定 包裝;250mg

3-吲哚丁酸/吲哚丁酸/4-(吲哚-3-基)丁酸/3-吲哚基丁酸/吲哚-3-丁酸/氮茚基丁酸/IBA/IUPAC 質量規格：>99%,SGLT-2抑制劑 包裝;25g

3-吲哚丁酸鉀/吲哚丁酸鉀/吲哚-3-丁酸鉀/IBA-K 質量規格：>95%,BR 包裝;5g

α-萘乙酸/1-萘乙酸/1-萘基乙酸/α-萘醋酸/2-(1-萘基)乙酸/NAA 質量規格：鑒別 包裝;1g

α-萘乙酸鉀/1-萘乙酸鉀/NAA-K 質量規格：含量測定 包裝;5g

β-萘乙酸/2-萘乙酸/β-萘醋酸/β-Naphthaleneacetic acid 質量規格：檢查 包裝;1g

多效唑/1-對-2-(1,2,4-三唑-1-基)-4,4-二甲-3-戊醇/(2RS,3RS)-1-(4-)-4,4-二甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)戊-3-醇/氯丁唑/1-(4-)-4,4-二甲基-2-(1,2,4-三唑-1-基)-3-戊醇/Paclobutrazol/PP333 質量規格：含量測定 包裝;5g

三十烷醇/1-三十烷醇/蜂花醇/正三十烷醇/三十醇/1-羥基三十烷/蜂花烷醇/Triacontanol 質量規格：>99%,BR 包裝;5ml

馬來酰肼/青鮮素/1,2-二氫-3,6-噠嗪二酮/順二酰肼/抑芽丹/本息/失蘋果酰肼/二羥基噠嗪/Maleic Hydrazide 質量規格：含量測定 包裝;1g
貝爾格萊德病毒型PCR檢測試劑盒說明書Aerococcus│viridans 中文名稱：綠色氣球菌種屬:Aerococcus│viridans分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物模式菌株:no培養方法培養基:33生長條件:20℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：>98.0%(HPLC)

Rhizobium│huautlense 中文名稱：華特拉根瘤菌種屬:Rhizobium│huautlense分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:476生長條件:20℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：>98.0%(HPLC)

Deinococcus│radiodurans 中文名稱：耐輻射異常球菌種屬:Deinococcus│radiodurans提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:教學科研，探討磷酸戊糖途徑與DNA輻射損傷修復機制的關系。培養方法培養基:33生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Bacillus│malacitensis 中文名稱：馬拉加芽孢桿菌種屬:Bacillus│malacitensis分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:33生長條件:20℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%

Brevibacterium│halotolerans 中文名稱：耐鹽短桿菌種屬:Brevibacterium│halotolerans分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:33生長條件:20-35℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%

Arthrobacter│scleromae 中文名稱：硬結節桿菌種屬:Arthrobacter│scleromae分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:33生長條件:20℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%

Pseudomonas│congelans 中文名稱：結冰假單胞菌種屬:Pseudomonas│congelans分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:33生長條件:20℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：>97.0%(GC)

Serratia│plymuthica 中文名稱：普利茅斯沙雷氏菌種屬:Serratia│plymuthica分離基物:土壤樣品提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:33生長條件:20℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：>97.0%(GC)