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          293 HEK-293 (胚腎細胞)說明書

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          更新日期:
          2024-08-29
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          產品特點:
          293 [HEK-293] (胚腎細胞)說明書的相關產品:AD檢測試劑盒價格adropin0.1AP2A2檢測試劑盒免費代測Adaptor-Related Protein Complex 2, alpha 2 Subunit1Ago-2檢測試劑盒說明書Argonaut20.1DHX9檢測試劑盒規格DHX91
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          產品屬性:

          產品名稱規格貨號
          293 [HEK-293] (胚腎細胞)說明書1×10?cells/T25培養瓶YS-01X6321

          產品名稱:293 [HEK-293] (胚腎細胞)

          規格:1×10?cells/T25培養瓶

          生長培養基:MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S

          名稱293 [HEK-293] (人胚腎細胞) (STR鑒定正確)

          別稱Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293

          背景描述293 [HEK-293]細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞,293 [HEK-293]細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出,293 [HEK-293]細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側端和右側端的DNA,但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現,Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主,可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。

          種屬人

          年齡(性別)胚胎

          組織來源腎;以腺病毒5DNA進行轉化

          生長特性貼壁細胞

          細胞形態上皮細胞樣

          細胞類型轉化細胞系

          生物安全等級2

          生長培養基MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S

          推薦傳代比例1:3-1:4

          推薦換液頻率2~3次/周

          倍增時間~24-30 hours

          凍存條件

          凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

          溫度:液氮

          培養條件

          氣相:空氣,95%;CO?,5%

          溫度:37℃

          致瘤性Yes, forms tumors in nude mice.

          受體表達情況vitronectin

          注意事項該細胞貼壁松散,操作時請盡量輕柔;換液時需預熱培養基;收貨如有大塊脫落的細胞團,為正常現象,請按照收貨注意事項處理。

          圖片13.jpg

          冷凍保存細胞之方法?

          冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

          冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


          實驗要點及說明:

          1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

          2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

          3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

          4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

          5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。


          實驗報告:

          一、分離與培養:

          1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;

          2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

          3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

          4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

          5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

          二、免疫熒光鑒定:

          1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

          2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

          3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

          4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

          5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

          6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

          小鼠β內啡肽(β-EP)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa檢測試劑盒    用途:僅供科研

          人Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽(ⅠCTP)elisa檢測試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)elisa檢測試劑盒    用途:僅供科研

          人轉酶2C多肽(TGM2)elisa檢測試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          人粘蛋白/粘液素7(MUC7)elisa檢測試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠體(TR)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠抗TR)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠P)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠FⅩ)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠Ⅸ)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠g)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠大內皮素(BigET)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

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          小鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

          人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒    Human cutaneous T cell-attracting chemokine, CTACK Elisa Kit    96T/48T

          人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)ELISA試劑盒    Human Breast and kidney expressed chemokine, BRAK Elisa Kit    96T/48T

          人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒     Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1, BLC-1 Elisa Kit    96T/48T

          人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒     Human connective tissue-activating peptide Ⅲ, CTAPⅢ Elisa Kit    96T/48T

          a Kit    96T/48T

          Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E, FcεRⅡ Elisa Kit    96T/48T

          G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

          G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit    96T/48T

          G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ  Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

          G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit     96T/48T

          人粒細胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒    Human granulocyte chemotactic protein-2, GCP-2 Elisa Kit     96T/48T

          人糖基化依賴的細胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒     Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1, GlyCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

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          人淋巴毒素β(LTB)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinβ, LTB Elisa Kit    96T/48T

          人淋巴毒素α(LTA)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinα, LTA Elisa Kit    96T/48T

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          培養操作:

          1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

          2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。

          1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

          2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

          3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。

          4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

          3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;

          1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

          2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。

          3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。



          產品相關關鍵字: 293 HEK-293 胚腎細胞
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