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            日本W(wǎng)AKO和光純藥
            *原時(shí)間試劑
            免疫組化代測(cè)服務(wù)
            質(zhì)粒
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            試劑盒
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          魚(yú)γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析說(shuō)明書(shū)

          點(diǎn)擊次數(shù):1074 更新時(shí)間:2012-05-11
           

          魚(yú)γ干擾素IFN-γ酶聯(lián)免疫分析

          試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

          本試劑盒僅供研究使用。

          檢測(cè)范圍:                                                          96T

          3ng/L - 90ng/L

          使用目的:

          本試劑盒用于測(cè)定魚(yú)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中γ干擾素(IFN-γ含量

          實(shí)驗(yàn)原理

          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本魚(yú)γ干擾素(IFN-γ水平。用純化的魚(yú)γ干擾素(IFN-γ抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ再與HRP標(biāo)記的γ干擾素(IFN-γ抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品魚(yú)γ干擾素(IFN-γ濃度。 

          試劑盒組成 

          1

          30倍濃縮洗滌液

          20ml×1

          7

          終止液

          6ml×1

          2

          酶標(biāo)試劑

          6ml×1

          8

          標(biāo)準(zhǔn)品(160 ng/L

          0.5ml×1

          3

          標(biāo)包被

          12孔×8

          9

          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          1.5ml×1

          4

          樣品稀釋液

          6ml×1

          10

          說(shuō)明書(shū)

          1

          5

          顯色劑A

          6ml×1

          11

          封板膜

          2張  

          6

          顯色劑B

          6ml×1/

          12

          密封袋

          1個(gè)

          標(biāo)本要求 

          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

          2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

          80ng/L

          5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          40ng/L

          4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          20ng/L

          3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          10ng/L

          2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          5ng/L

          1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻

          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

          4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

          6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 

          7. 溫育:操作同3

          8. 洗滌:操作同5

          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

          10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)

          11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值) 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

          操作程序總結(jié):

          計(jì)算

            以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。 

          注意事項(xiàng)

          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

          2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

          4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

          5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

          6.底物請(qǐng)避光保存。

          7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

          9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

          10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

          保存條件及有效期

          1試劑盒保存:2-8

          2.有效期:6個(gè)月

           
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