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          人乙腦(JE)Elisa試劑盒定性說明書

          點擊次數(shù):1257 更新時間:2011-12-19
           

          人乙腦(JE)Elisa試劑盒定性說明書
          本試劑盒僅供研究使用
          檢測范圍:96T
          使用目的:
          本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中乙腦(JE)表達。
          實驗原理:
          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人乙腦(JE)表達。用純化的人乙腦(JE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中乙腦(JE)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的乙腦(JE)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF 值相比較,從而判定標本中人乙腦(JE)的存在與否。
          試劑盒組成:
          1、30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
          2、酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶
          3、酶標包被板12 孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶
          4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
          5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
          6、顯色劑B液6ml×1瓶12密封袋1個
          標本要求:
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
          2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟:
          1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
          2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
          4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
          7. 溫育:操作同3。
          8. 洗滌:操作同5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
          11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
          操作程序總結(jié):
          計算和結(jié)果判定:
          試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
          臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
          陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為乙腦(JE)陰性
          陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為乙腦(JE)陽性。
          注意事項:
          1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
          2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
          4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          5.底物請避光保存。
          6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
          7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸,使用時必須注意安全。
          保存條件及有效期:
          1.試劑盒保存:2-8℃。
          2.有效期:6 個月
           

           
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