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          雞(Chicken) 白細胞介素1(IL-1) ELISA 檢測試劑盒

          點擊次數:1328 更新時間:2012-05-08
           

          (Chicken) 白細胞介素1IL-1) ELISA 檢測試劑盒

          本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

          試驗原理

          IL-1試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA.已知IL-1濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-1和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-1的濃度呈比例關系。

          試劑盒內容及其配制

          試劑盒成份(2-8℃保存)

          96孔配置

          48孔配置

          配制

          96/48人份酶標板

          1塊板(96T

          半塊板(48T

          即用型

          塑料膜板蓋

          1

          半塊

          即用型

          標準品:800pg/ml

          1瓶(0.6ml

          1瓶(0.3ml

          按說明書進行稀稀

          空白對照

          1瓶(1.0ml

          1瓶(0.5ml

          即用型

          標準品稀釋緩沖液

          1瓶(5ml

          1瓶(2.5ml

          即用型

          生物素標記的抗IL-1抗體

          1瓶(6ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          親和鏈酶素-HRP

          1瓶(10ml

          1瓶(5.0ml

          即用型

          洗滌緩沖液

          1瓶(20ml

          1瓶(10ml

          按說明書進行稀釋

          底物A

          1瓶(6.0ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          底物B

          1瓶(6.0ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          終止液

          1瓶(6.0ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          標本稀釋液

          1瓶(12ml

          1瓶(6.0ml

          即用型

          (Chicken) 白細胞介素1IL-1) ELISA 檢測試劑盒

          自備材料

          1. 蒸餾水。

          2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

          3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

          安全性

          1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

          2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

          3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

          操作注意事項

          1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

          2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

          3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

          4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物AB液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

          5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

          6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

          7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

          8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

          9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

          樣品收集、處理及保存方法

          1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

          2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

          3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液

          5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          (Chicken) 白細胞介素1IL-1) ELISA 檢測試劑盒

          試劑的準備

          1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

          800 pg/ml

          6號標準品)

          原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

          400 pg/ml

          5號標準品)

          100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

          200 pg/ml

          4號標準品)

          100ul5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          100 pg/ml

          3號標準品)

          100ul4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          50 pg/ml

          2號標準品)

          100ul3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          25 pg/ml

          1號標準品)

          100ul2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          0 pg/ml

          (空白對照)

          原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

          2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

          操作步驟

          1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

          2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液11稀釋后加入50ul于反應孔內。

          3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

          4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

          5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

          6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

          7. 每孔加入底物A、B50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

          8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

          9. 450nm波長處測定各孔的OD值。

          (Chicken) 白細胞介素1IL-1) ELISA 檢測試劑盒

          建議使用的實驗方案

          標準品濃度(pg/ml

          A

          800

          800

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

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          樣品

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          B

          400

          400

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          C

          200

          200

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          D

          100

          100

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          E

          50

          50

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          F

          25

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          H

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          試劑盒性能

          1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

          2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

          3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

          局限

          6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

          結 果 判 斷 與 分 析

          1儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD

          2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-1標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-1含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

          3檢測值范圍:0-800pg/ml

          4敏感度: 1.0 pg/ml

           
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