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          TUNEL 與 ELISA 檢測凋亡的方法比較

          點擊次數(shù):999 更新時間:2012-01-13
           

          TUNEL 與 ELISA 檢測凋亡的方法比較
          TUNEL法
            細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。TUNEL實際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色,能準(zhǔn)確地反應(yīng)細胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征,可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細胞和從組織中分離的細胞的細胞形態(tài)測定,并可檢測出極少量的凋亡細胞,因而在細胞凋亡的研究中被廣泛采用.
          ELISA法測細胞凋亡
          細胞凋亡時,Ca2+,Mg2+離子依賴的內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將雙鏈DNA從各核小體間連接區(qū)裂斷,產(chǎn)生單或寡合苷酸小體,各核小體的DNA與核組蛋白H2A,H2B,H3,H4形成緊密的復(fù)合物而對內(nèi)源性核酸酶有抵抗使之不被內(nèi)源性核酸酶裂解。主要使用單克隆抗DNA抗體和抗組蛋白抗體直接檢測DNA和組蛋白。
          TUNEL 與 ELISA 檢測凋亡的方法比較
           

           
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