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          小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)酶聯免疫分析(ELISA)說明書

          點擊次數:1038 更新時間:2011-12-27
           

          小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)酶聯免疫分析(ELISA)說明書
          本試劑僅供研究使用
          目的:本試劑盒用于測小鼠血清,血漿及相關液體樣本中幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)的含量。
          實驗原理:
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)水平。用純化的小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG),再與HRP標記的幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)濃度。
          樣本處理及要求:
          1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
          2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
          3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
          4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
          5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
          6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
          7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          計算:
          以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
          試劑盒性能:
          1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。
          2.批內與批見應分別小于9%和11%
          檢測范圍:
          100ng/L -2000ng/L
          保存條件及有效期:
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6個月

           

           
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