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          大鼠磷酸化κB抑制蛋白(PIKBa)酶聯免疫檢測分析

          點擊次數:1412 更新時間:2011-12-21
           

          大鼠磷酸化κB抑制蛋白(PIKBa)酶聯免疫檢測分析
          本試劑盒僅供研究使用。
          藥品名稱:
          通用名:大鼠磷酸化乙酰輔酶 A 羧化酶(pACCase)酶聯免疫分析試劑盒
          使用目的:
          本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿中大鼠磷酸化乙酰輔酶 A羧化酶(pACCase) 含量。
          實驗原理
          用純化的大鼠磷酸化乙酰輔酶 A 羧化酶(pACCase) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(pACCase) 再與HRP標記的大鼠磷酸化乙酰輔酶 A羧化酶(pACCase) 抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠磷酸化乙酰輔酶 A 羧化酶(pACCase) 呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(pACCase) 濃度。
          試劑盒組成
          1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
          2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(270ng/L) 0.5ml×1 瓶
          3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
          4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
          5 顯色劑 A液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
          6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
          標本要求
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟
          1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L)。
          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
          4. 配液:將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
          7. 溫育:操作同 3。
          8. 洗滌:操作同 5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
          11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。
          計算
          以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式, 將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
          注意事項
          1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
          3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
          4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5) 。
          5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          6.底物請避光保存。
          7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
          檢測范圍:
          10ng/L -200ng/L
          規格:
          96 人份/盒
          保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6 個月

           
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