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          分子生物學(xué)常用試劑的配制

          點(diǎn)擊次數(shù):2564 更新時(shí)間:2011-05-17
           

          .LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)液、平板的配制
            配制每升LB培養(yǎng)液,應(yīng)在950ml去離子水中加入:
            細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物(bacto-yeastextract) 5g
            細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g
            NaCl 10g
            搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)*溶解,用5mol/LNaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)pH值至7.0,加入去離子水至總體積為1L,在 15 1bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌 20min。
            LB 瓊脂平板的配制:
          先按上述配方配制液體培養(yǎng)基,臨高壓滅菌前加入瓊脂糖 15g /L,同法高壓蒸汽滅菌 20min。從高壓滅菌器取出培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)輕輕旋動(dòng)以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個(gè)培養(yǎng)基溶液中,應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50℃時(shí),加入抗生素等不耐熱的物質(zhì)。為避免產(chǎn)生氣泡,混勻培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)采取旋動(dòng)的方式,然后可直接從燒瓶中傾出培養(yǎng)基鋪制平板。90mm直徑的培養(yǎng)皿約需30-50ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)基*凝結(jié)后,應(yīng)倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆谩?/p>

          2.瓊脂糖凝膠的配制
            根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應(yīng)電泳緩沖液中,用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖*溶解,加入適量 EB 混勻,適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過(guò)梳孔,如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除,不能過(guò)早拔除梳子,應(yīng)待凝膠*凝結(jié)后才能拔除梳子。

          3.P1、P2、P3的配制P1 的配制:在 800ml 去離子水中溶入 Tris 堿 6.06g,Na2EDTA?2H2O 3.72g,用 HCl 調(diào)整 pH 至 8.0,用去離子水調(diào)整容積至1升,每升P1內(nèi)加入RNaseA100mg。
          P2 的配制:在 950ml 去離子水中溶入 NaOH 8.0g,20%SDS 50ml,調(diào)整容積至 1 升。
          P3 的配制:在 500ml 去離子水中溶入醋酸鉀 294.5g,用冰醋酸調(diào)整 pH 值至 5.5,用去離子水調(diào)整容積至1升。

          4.常用緩沖液:
          TE
          pH 7.4
          10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
          1mmol/L EDTA(pH8.0)
          pH 7.6
          10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
          1mmol/L EDTA(pH8.0)
          pH 8.0
          10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
          1mmol/L EDTA(pH8.0)
          STE(亦稱 TEN)
          0.1mmol/L NaCl
          10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
          1mmol/L EDTA(pH8.0)
          STET
          0.1mmol/L NaCl
          10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
          1mmol/L EDTA(pH8.0)
          5%Triton X-100
          TNT
          10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
          150mmol/L NaCl
          0.05% Tween 20
          電泳緩沖液
          Tris-乙酸(TAE):50×濃貯存液(每升):242g Tris 堿


          5 7.1ml 冰乙酸
          100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
          使用時(shí)再稀釋50倍。


          Tris-磷酸(TPE):10×濃貯存液(每升):108g Tris 堿
          15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml)
          40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
          使用時(shí)再稀釋10倍。


          Tris-硼酸(TBE):5×濃貯存液(每升):54g Tris 堿
          27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
          使用時(shí)再稀釋10倍。


          堿性緩沖液:1×使用液(每升):5ml10mol/L NaOH
          2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)


          Tris-甘氨酸:5×濃貯存液(每升):15.1g Tris 堿
          94g 甘氨酸(電泳級(jí))(pH8.3)
          50ml 10%SDS(電泳級(jí))
          2×SDS 凝膠加樣緩沖液
          100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
          200mmol/L 二硫蘇糖醇(DTT)
          4%SDS(電泳級(jí))
          0.2%溴酚藍(lán)
          20%甘油


          30%丙烯酰胺:
          將29g 丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中,加熱至37℃溶解之,補(bǔ)加
          水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過(guò)濾除菌查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中
          保存于室溫。


          10mol/L 乙酸銨:
          把770g 乙酸銨溶解于800ml水中,加水定容至1L后過(guò)濾除菌。


          1mol/LCaCl2:
          在200ml純水中(Milli-Q水或相當(dāng)級(jí)別的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過(guò)濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。


          2.5mol/LCaCl2:
          在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過(guò)濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。


          1mol/L 二硫蘇糖醇(DTT):
          用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過(guò)濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。


          0.5mol/LEDTA(pH8.0):
          在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0,然后定容至1升,分裝后高壓滅菌備用。


          溴化乙錠(10mg/ml):
          在100ml水中加入1g 溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其*溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中,保存于室溫。


          1mol/LMgCl2:
          在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分裝成小份并高壓滅菌備用。


          酚::
          把酚和等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保存于4℃。


          磷酸緩沖鹽溶液(PBS):
          在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH 值至 7.4,加水定容至 1 升,高壓蒸汽滅菌 20min。保存于室溫。


          乙酸鉀溶液(用于堿裂解):
          在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。


          3mol/L 乙酸鈉(pH5.2 和 7.0):
          在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸鈉,用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。


          1mol/LTris:
          在800ml水中溶解121.1gTris堿,加入濃HCl調(diào)節(jié)pH至所需值。
          pH HCl
          7.4 70ml
          7.6 60ml
          8.0 42ml
          應(yīng)使溶液冷至室溫后方可zui后調(diào)定pH值,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。


          Tris 緩沖鹽溶液(TBS):
          在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,加入0.015酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保存。


          5mmol/LNH4Ac 溶液:
          秤取乙酸銨192.7g,加重蒸水250ml混勻,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。


          10mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)溶液:
          秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>


          10%十二烷基硫酸鈉(SDS):
          在900ml水中溶解100g 電泳級(jí)SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分裝備用。


           

           
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