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          煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法

          點擊次數:536 更新時間:2024-04-22
           

          煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法


          1. 樣品處理(樣本處理區)


          1.1 樣本前處理


          按照試劑盒操作說明或者微生物樣品處理方法做好樣品前處理。


          1.2 DNA 提取


          根據您實驗室的具體情況和樣品類型,選擇適當的提取策略方法。為了使實驗結果穩定、有效、可靠,我們建議使用商品化的試劑盒進行提取,嚴格按照對應試劑盒說明書進行操作,樣本核酸提取過程中應避免污染,提取好的模板樣品如不能立即檢測,建議-15℃以下保存。


          推薦采用我們公司研發生產的試劑盒:Hypure 病毒基因組 DNA 提取試劑盒


          2. 試劑配制(試劑準備區)


          2.1 從-15℃以下冰箱中取出試劑盒平衡到室溫(20~25℃),注意避免強光照射,待溶解后振蕩混勻并低速離心 10 s,使用低吸附吸頭分液取樣,避免試劑損失和浪費。


          2.2 根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:


          試劑


          煙曲霉反應液


          煙曲霉擴增液


          用量(樣本數為N)


          19.5μL


          0.5μL


          2.3 在適當容積的無菌離心管中加入上述試劑,充分振蕩混勻后 2000 rpm 離心 10 s,按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至八聯 PCR 反應管中。


          2.4 蓋緊八聯 PCR 反應管蓋, 并注意做好相應標識(請標記在八聯 PCR 反應管蓋兩端突出部位,切勿標記在八聯 PCR 反應管蓋中間,以免影響信號采集)。將 PCR 反應管轉移至樣本準備區,剩余試劑放回-15℃以下冰箱冷凍保存。


          3. 加樣(樣本處理區)


          將步驟 1.2 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心,核酸加樣過程中應避免污染。






           
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