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          摩氏摩根菌LAMP試劑盒反應(yīng)五要素

          點擊次數(shù):721 更新時間:2022-05-10
           

          摩氏摩根菌LAMP試劑盒反應(yīng)五要素:


          參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 


          引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。


          設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:


          ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


          ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


          ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 


          ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。


          ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。 


          ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。


          ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 

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