普氏立克次體(RP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)準備試劑與收集血樣：

雙重核酸試劑盒（熒光PCR法）　1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

性能：

1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 U/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月

黑人Burkitt淋巴瘤細胞；RAJI

人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS

人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS(RA.1)

人腦瘤細胞；SF126

人腦瘤細胞；SF763

人腦瘤細胞；SF767

人皮膚黑色素瘤細胞；SK-MEL-1

人腎上腺皮質(zhì)癌細胞；SW-13

人結(jié)直腸癌細胞；T84

人急性單核細胞白血病細胞；THP-1

人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞；U251

人組織細胞淋巴瘤細胞；U937 [U-937]

人胃腺癌細胞；BGC-823

人低分化肺腺癌細胞；GLC-82 [GLC82]

人喉癌上皮細胞；Hep-2

人纖維肉瘤細胞；HT-1080

人絨癌細胞；JEG-3

人耐VP16絨癌細胞株；JEG-3/VP16

白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞；JEG-3/VP16-IL-2

TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞；JEG-3-VP16-TNFa

人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat, Clone E6-1

人神經(jīng)母細胞瘤細胞；BE(2)-M17

人乳腺癌細胞；MDA-MB-157

人成骨肉瘤細胞；MG-63

人小細胞肺癌細胞；NCI-H446

人多發(fā)性骨髓瘤細胞；RPMI-8226 [RPMI8826]

人腦瘤細胞；SF17